タンパク質発現精製・細胞培養

タンパク質発現・精製受託

多数の組換えタンパク質取得経験あり
発現条件・培養条件・精製条件を探索検討いたします

ベクター構築～発現・精製条件検討、大量培養・精製まで。

ご希望のベクター構築、ベクター設計コンサルティング。

Gene情報（Gene BankのAccession No.もしくは配列）のみでタンパク質の使用目的に合わせた試験計画をご提案。

大腸菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞の系を同時に発現・比較検討可能。

検討後の新たなプロトコールはすべてお客様のものです。

ベクター構築～発現・精製条件検討、大量培養・精製まで。

ご希望のベクター構築、ベクター設計コンサルティング。

Gene情報（Gene BankのAccession No.もしくは配列）のみでタンパク質の使用目的に合わせた試験計画をご提案。

大腸菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞の系を同時に発現・比較検討可能。

検討後の新たなプロトコールはすべてお客様のものです。

ベクター構築～発現・精製条件検討、大量培養・精製まで。

ご希望のベクター構築、ベクター設計コンサルティング。

Gene情報（Gene BankのAccession No.もしくは配列）のみでタンパク質の使用目的に合わせた試験計画をご提案。

大腸菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞の系を同時に発現・比較検討可能。

検討後の新たなプロトコールはすべてお客様のものです。

発現が少ない！
とにかく急いでいる！

ユニーテック株式会社

ユニーテックでは豊富な経験と実績に基づき、独自に使用目的に合わせた試験計画をご提案し、
目的のタンパク質発現・培養・精製条件を検討いたします。

収得タンパク質をそのまま実験に使用されてもOK。

確立したプロトコールで大量収得・精製へ・・もちろんOK。

収得タンパク質をそのまま実験に使用されてもOK。

確立したプロトコールで大量収得・精製へ・・もちろんOK。

遺伝子情報・タンパク質発現目的のみで最適な発現ベクターを数週間で作製いたします

豊富な経験（数千のベクター設計）に基づいた適切な設計

目的、ホスト細胞に合わせたPromoter、Enhancerの選択

豊富な経験（数千のベクター設計）に基づいた適切な設計

目的、ホスト細胞に合わせたPromoter、Enhancerの選択

1）Kozak、Signal配列、Tag、Reporter等ご目的に合わせて設計いたします。

2）PCRや制限酵素サイトを用いてcDNAを挿入

3）insert部のDNAシークエンス確認

作製実績：pET系、pCDNA3.1系など、多数の発現用ベクターの構築実績あり
（ベクター構築不可かぎりなく0の実績）

No.	工程	作業内容	価格（税抜）	期間
1	ベクター構築	cDNAの発現ベクターへの挿入、配列確認	150,000円～	–

・codon usage最適化（アミノ酸配列はそのままで大腸菌の好む塩基配列に変換）
・より可溶性発現しやすい誘導条件、培養条件の探索を致します。
・不溶性画分（inclusion body）発現タンパク質のRefolding
・数100mL～100L培養・精製に対応可能。発現量の目安：10～100mg/L

遺伝子組換え大腸菌の培養・タンパク質精製

No.	工程	作業内容	価格（税抜）	期間
1	発現ベクター構築	cDNAの発現ベクターへの挿入、配列確認	150,000円～	–
2	発現条件検討（定性試験）	温度、培養時間による発現検討必要によってはIPTG濃度やホスト大腸菌の検討	220,000円	2週間
3	Trial培養(250ml)	条件検討で良かった条件でTrial培養	140,000円	1週間
4	Trial精製	アフィニティ精製（Hisタグ精製の場合）（SDS-PAGE、ウエスタンブロット含む）	240,000円	1週間
5	オプション：ゲルろ過カラム精製	HPLCを使いカラム精製	270,000円	1週間
5	オプション：イオン交換カラム精製	HPLCを使いカラム精製	180,000円	1週間
6	中間報告書提出	SDS-PAGE、ウエスタンブロット、収量の報告	30,000円	2日間
7	本培養	収量から必要な培養量を計算し、本培養を行う	基本料金100,000円 +25,000円/L	–
8	本精製	別途お見積り	別途お見積り	–

※発現条件検討内容：(1)温度3条件、(2)培養時間4条件の12条件
※試験によってIPTG濃度やホスト大腸菌の検討を行います。

大腸菌を用いたタンパク質発現・精製の一例

2.発現条件検討の一例

（時間・温度による発現量の変化）

4.Trial精製の一例
（Ni NTAによるアフィニティ精製）

破砕上清のSDS－PAGE

37℃、30℃、16℃でそれぞれ培養し、3時間後、6時間後、18時間後、24時間後の菌体を回収、破砕し上清をSDS－PAGEした。

30℃、3時間培養が最も可溶化した上清に多いことがわかる。
37℃培養だと目的タンパク質の多くは不溶化していた（data nota shown）。

250mL Trial培養からNi NTAを用いた精製の一例。
破砕上清をNi NTAに結合させ、素通り画分、洗浄画分、溶出画分をそれぞれSDS-PAGEしたもの。
アフィニティ精製でもかなり純度良く精製出来ている。

遺伝子組換え酵母を用いた培養・タンパク質精製

・比較的分子量が大きいタンパク質を可溶性タンパク質として発現させ易い。
・真核生物に近いタンパク質が得られる。
・動物細胞よりウイルス混入等の危険が少ない。
・ファーメンター培養で対応可能。
・発現条件、培養条件、精製条件を探索検討致します。もちろん検討プロトコールはすべてお渡し致します。

工程	価格（税抜）	期間
発現ベクター構築	150,000円～	–
発現条件検討（定性試験）	250,000円	3週間
Trial培養（200ml)	200,000円	1週間
Trial精製（通常アフィニティ精製）　（SDS-PAGE、ウエスタンブロット含む）	300,000円	2週間
オプション：ゲルろ過カラム精製	270,000円	1週間
オプション：イオン交換カラム精製	180,000円	1週間
中間報告書提出　SDS-PAGE、ウエスタンブロット、収量の報告	30,000円	2日間
本培養	基本料金100,000円 +40,000円/L	–
本精製	別途お見積り	–